Zāle Holy Rood pilī. Viņš saka, ka pilsētā ir nemieri. Viņam pūļa galvā kāds nepazīstams - māmiņas, maskētas, dejotāji ar zvaniņiem, cilvēki melnos kapucēs - draudēja, paredzēja un mudināja cilvēkus nepakļauties karalienei. Karalienes Ričio galma tiesa apstiprina, ka viņš arī laiku pa laikam vēro, kā cilvēki labprāt klausās šos sprediķus. Lapā tālāk stāstīts, ka ļaudis iekļuvuši karalienes kapelā, kliedzot: “Papista ligzda!”, Ka karalienes vīra Darnlija bufons uzlēcis uz altāra un sācis izlikties, ka ir sprediķis, un ļaudis viņam atbildējuši ar ņirgāšanās pantiem. Karaliene Marija Stjuarte izmisumā. Viņa izjūt naidu pret cilvēkiem; lielākā daļa galminieku viņu ir pametuši; viņa domā, kā viņas kristietība var tik ļoti atšķirties no Skotijas cilvēku kristietības. Riccio ierosina nekavējoties sagatavot dekrētu, ar kuru tiek sodīti par nemieriem atbildīgie. Marija diktē savu lapu, lapa precizē, vai jāievada Heinriha Darnlija - karalienes vīra - vārds. Marija vilcinās; viņai ir aizdomas, ka nemieri viņu iedvesmojuši - galu galā pūli vadīja karaļa bufetīte. Šeit Riccio viņai atgādina, ka viņa ir karaliene; viņa ir kā saule, un viņai ir tiesības sodīt no Dieva. Viņš pieprasa nekavējoties piezvanīt dežurantam, lai paziņotu par karalienes dekrētu. Douglas ieiet. Marija liek viņam aiznest papīru Karaliskajam kancleram Mortonam, lai viņš apzīmogotu. Douglas skenē dekrētu un redz, ka tam nav karaļa vārda. Viņš jautā karalienei par to. Riccio ir atbildīga par viņu. Douglas zaudē savu temperamentu. Viņš mudina karalieni nelietot asiņainas represijas, māca, ka uzskata to par Francijas vai Itālijas ietekmi. Bet karaliene aukstasinīgi viņam atgādina par viņas spēju novērst subjektus, kas nepaklausa viņas gribai. Starp Riccio un Douglas izceļas strīds, Douglas izaicina Riccio uz dueli un zvēr, ka rīt nogalinās venēcieti. Karaliene aiziet un aizved Riccio prom. Douglas ir atstāts viens, viņš apsver iespēju izspēlēt dueli. Mortons ieiet. Douglas parāda viņam dekrētu. Mortons ir neizlēmīgs: viņš baidās gan no ķēniņa, gan karalienes dusmām. Bez štancēšanas Mortons piedāvā ķēniņu. Šajā laikā Henrijs iesaistījās sarunā ar savu jestru Niku, kurš viņu samierina ar faktu, ka karalienei Skotijā ir reāla vara, un Henrija ir tikai viņas vīrs, ka karaliene izvēlas tuvākos, piemēram, šo itāļu harfistu Riccio ... Šajā laikā Mortons nes neveiksmīgu dekrētu. Karalis dusmās izlemj nogalināt Riccio. Karalis Lindsijs nonāk tiesā, viņš aicina karali medīt ar tikko iegūto piekūnu. Mortons atbild, ka karalim šodien jau ir okupācija. Lindsay labprāt pievienojas zemes gabalam pret Riccio. Viņš burtiski aizliedz nogalināt Riccio šovakar, jo viņam tas jānogalina rīt no rīta. Tad Henrijs, izmantojot aizkavēšanos, nosūta jestru astrologam, lai uzzinātu, kāda ir viņa nodomu zvaigžņu atrašanās vieta.

Astrologs savā laboratorijā (viņš ir arī alķīmiķis) ar sevi apgalvo, ka pieredze apstiprina zinātnes veltīgumu, šim nolūkam zvaigžņu griba valda cilvēkā, atbrīvojas no labā un ļaunā. Niks ienāk, pārkaisa ar asprātību, astrologs nav asāks par viņu asprātībā. Niks ziņo, ka karalis viņu nosūtīja, lai jautātu par Riccio likteni, un liek astrologam paredzēt Riccio nāvi. Astrologs atbild, ka zvaigznes pateiks viņam, nevis cilvēkiem, un, savukārt, prognozē jestera nāvi. Ar to viņš aizbrauc. Parādās astrologa izraisītā karalienes lapa. Lapa mīl savu kundzi. Astrologs liek viņam pateikt karalienei, ka šodien vīrietis, kuru viņa mīl, mirs. "Kā Botvels šodien mirs?" - iesaucas lapa. Astrologs ir neizpratnē. Viņam bija prātā Riccio un viņš steidz lapu, lai brīdinātu viņu par to. Palicis viens pats, astrologs brīnās - arī no zvaigznēm parādījās, ka Botvels kaut kādā veidā ir tumši saistīts ar karalieni - caur Marsu, Saturnu ... Botvels ieiet. Pēc viņa monologa kļūst skaidrs, ka viņš negaidīti nonācis astrologa mājā. Saprotot, kurp viņš devās, Botvels astrologam pajautāja, cik daudz viņam vajag dzīvot. Vecais vīrs atbild, ka trīs gadi un Botvels būs karalis. Botvelis izņem indes pudeli, ar kuru viņš gribēja izdarīt pašnāvību, vēlas to izmest - un vilcinās. Patiešām, pils intrigu atmosfērā noderēs jebkurš ierocis. Viņš aiziet.

Lapā karalienei teikts, ka Rikijs ieradīsies drīz. Karaliene viņu ļoti gaida - pēc viņas domām, viņš vienīgais palika viņai uzticīgs. "Un Botvel?" Lapa jautā. "Kas ir Botvel?" - karaliene interesējas. Pārsteigtā lappusē Marijai teikts, ka, laivojot, stiprs vējš no karalienes galvas noplūca rozi, ūdenī iekrita zieds. Un tad viens no galminiekiem - Botvels - metās laivā un nobijās no airētāja, lai no ūdens noķertu rozi. Pēc stāsta dzirdēšanas Marija nosūta lapu lūgšanai. Viņa atzīst Dievam, ka viņai vairs nav spēka pretoties viņas mīlestībai pret Botvelu. Karaliene zina, ka tiesā viņa tiek uzskatīta par iemīlējušu Rikiju. Riccio ieiet. Marija ziņo par mirstīgām briesmām, kas viņu apdraud, un aukstasinīgi atvadās no viņa, norādot uz kuģi, kas viņu aizvedīs uz Romu. Izmisumā Riccio mēģina lūgt karalieni atcelt lēmumu pamest. Karaliene ir nelokāma.

Heinrihs, Mortons un Lindsijs uzzināja par Ričio gaidāmo aiziešanu un steigā apņēmās viņu nogalināt vai ļaut kuģot. Tad parādās Douglass un ziņo, ka Riccio jau ir kuģojis. Douglas izmisumā, viņš ilgojas pēc asiņainas atriebības, viņa bruņinieku gods tiek ievainots. Pēkšņi viņi satiek lapu, kurā karaliene atnes Riccio piezīmi - viņš nepameta un vakarā būs kopā ar viņu. Sazvērnieki noņem piezīmi.

Marija ir aizņemta, izšūstot savā istabā. Atnācis Ričio viņai paskaidro, ka viņš nevarēja pamest, jo viņam no rīta ir duelis ar Douglasu. Viņš atzīst, ka viņam nav vajadzīga dzīve bez viņas mīlestības. Viņš lūdz Mariju dot viņam rožu vainagu - viņš Romā iestādīs ziedus uz altāra ... Henrijs, Douglass un Dindsay ienāk un nogalina Riccio. Karaliene noģībst. Douglasu pārsteidza kauns un šausmas - viņš labprātīgi dodas trimdā. Henrijs uztraucas, vai karaliene viņu ienīdīs. Lindsijs aizved ķēniņu, pačukstot viņam par gaidāmo medību. Karaliene uzaicina Botvelu. Marija nonāk pie sajūtas, ierauga Botvelu un atzīstas mīlestībā pret viņu. Botwell piespiež viņu atzīt, ka viņa vēlas Henrija nāvi, un dod viņai savu inde pudeli, sakot, ka šī ir miega tablete. Marija dod karalim šīs "zāles", bet inde dzer bufonu. Tomēr nekas nevar apturēt slepkavības intrigu - Botvels uzspridzina karaļa Henrija māju. Tālumā dzirdami arvien lielāki pūļa saucieni. Botvel ar karalieni slēpjas.